تست Bradford یکی از روشهای استاندارد، سریع و بسیار حساس برای تعیین غلظت پروتئینها در نمونههای زیستی است. این روش بهطور گسترده در آزمایشگاههای زیستمولکولی، بیوشیمیایی و پروتئومیک برای ارزیابی میزان پروتئین استخراجشده از سلولها، بافتها و نمونههای محیط کشت استفاده میشود. یکی از مزیتهای اصلی این روش، حساسیت بالا حتی برای نمونههای کم حجم و همچنین سادگی اجرای عملیاتی آن است.
تست Bradford بر پایه واکنش پروتئینها با رنگ کوماسی بریلیانت بلو G-250 (Coomassie Brilliant Blue G-250) انجام میشود. در محیط اسیدی، این رنگ سه فرم یونی دارد: 🔸️فرم کاتیونی (قرمز) 🔸️فرم نوترال (سبز) 🔸️فرم آنیونی (آبی)، در حضور پروتئین، به ویژه آرژنین، لیزین و دیگر آمینواسیدهای با بار مثبت و همچنین بخشهای هیدروفوبیک پروتئین، رنگ از فرم کاتیونی به فرم آنیونی تغییر میکند. این تغییر رنگ باعث افزایش جذب نوری در طول موج 595 نانومتر میشود. شدت این جذب با غلظت پروتئین موجود در نمونه رابطه مستقیم دارد و امکان تعیین کمی پروتئین را فراهم میکند./p>
در اگزوبایوژن، تست Bradford با رعایت استانداردهای دقیق آزمایشگاهی و استفاده از کنترلها و استانداردهای معتبر مانند BSA (Bovine Serum Albumin) انجام میشود. مراحل کلی شامل: آمادهسازی سری رقتهای استاندارد برای رسم منحنی استاندارد و تعیین دقیق غلظت نمونهها✔️ اضافه کردن محلول رنگ Coomassie Brilliant Blue G-250 به نمونهها و استانداردها✔️ انکوباسیون کوتاه مدت در دمای اتاق برای تثبیت رنگ✔️ اندازهگیری شدت جذب در طول موج 595 نانومتر با اسپکتروفتومتر✔️ محاسبه غلظت پروتئین نمونهها بر اساس منحنی استاندارد✔️/p>
🔷️تست Bradford نسبت به بسیاری از پروتئینها حساسیت بالایی دارد، اما واکنش آن با پروتئینهای حاوی آرژنین بیشتر است و ممکن است با برخی معرفها یا عوامل احیاء تداخل داشته باشد. 🔷️حساسیت و دقت تست بستگی به تعیین دقیق منحنی استاندارد و کنترل شرایط pH و غلظت رنگ دارد. 🔷️این روش برای نمونههای سلولی، بافتی، سوپرناتانتها و پروتئینهای بازسازیشده کاربرد دارد و معمولاً پیش از سایر آزمایشهای بیوشیمیایی مانند SDS-PAGE یا Western blot مورد استفاده قرار میگیرد./p>
استفاده از تست Bradford امکان اندازهگیری سریع و قابل اعتماد پروتئینها را فراهم میکند و یکی از پایههای ضروری در پژوهشهای زیستمولکولی، داروسازی، بیوتکنولوژی و پروتئومیک محسوب میشود. دقت و تکرارپذیری دادهها در این روش، آن را به ابزاری کلیدی برای کنترل کیفیت نمونهها و برنامهریزی دقیق آزمایشهای بعدی تبدیل کرده است. اگزوبایوژن در تلاش است که در این مسیر، با ارائه خدمات دقیق و علمی، به محققان کمک کند تا پژوهشهای خود را با اطمینان و کیفیت بالاتر پیش ببرند.
